| 產(chǎn)品編號 | D-9115 |
| 英文名稱 | DiI iodide |
| 中文名稱 | DiI碘化物 |
| 別 名 | DiI iodide [1,1‘-Dioctadecyl-3,3,3’,3‘- tetramethylindocarbocyanine iodide] |
| CAS | N/A |
| 保存條件 | Store at -20℃, protect from light. |
| 產(chǎn)品介紹 |
DiI, DiO, DiD and DiR dyes are a family of lipophilic fluorescent stains for labeling membranes and other hydrophobic structures. The fluorescence of these environment-sensitive dyes is greatly enhanced when incorporated into membranes or bound to lipophilic biomolecules such as proteins although they are weakly fluorescent in water. They have high extinction coefficients, polarity-dependent fluorescence and short excited-state lifetimes. Once applied to cells, these dyes diffuse laterally within the cellular plasma membranes, resulting in even staining of the entire cell at their optimal concentrations. The distinct fluorescence colors of DiI (orange fluorescence), DiO (green fluorescence), DiD (red fluorescence) and DiR (deep red fluorescent) provide a convenient tool for multicolor imaging and flow cytometric analysis of live cells. DiO and DiI can be used with standard FITC and TRITC filters respectively. Among them DiI and its analogs are most frequently used since they usually exhibit very low cell toxicity. In addition, DiI is widely used for determining lipoproteins such as LDL and HDL. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏色區(qū)分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體成像中用來示蹤。 儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。 溶解性：可溶于無水乙醇、DMSO和DMF，其中在DMSO中溶解度大于10mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當加熱，并用超聲處理以促進溶解。 使用方法 1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備 （1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。 注意：未使用的儲存液保存在-20 oC，避免反復凍融。 （2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。 注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經(jīng)驗來配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找最佳條件。 2. 懸浮細胞染色 （1）懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。 （2）在37 ℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。 （3）染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鐘。 （4）傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37℃的培養(yǎng)液。 （5）重復（3），（4）步驟兩次以上。 3. 粘壁細胞的染色 （1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。 （2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。 （3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。 （4）在37 ℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。 （5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。 4. 顯微鏡檢測 （1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。 （2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定： a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004； b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007； c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005 5. 流式細胞儀的檢測 DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。 |
| 1、抗體溶解方法 | |
| 2、抗體修復方式 | |
| 3、常用試劑的配制 | |
| 4、免疫組化操作步驟 | |
| 5、免疫組化問題解答 | |
| 6、Western Blotting 操作步驟 | |
| 7、Western Blotting 問題解答 | |
| 8、關于肽鏈的設計 | |
| 9、多肽的溶解與保存 | |
| 10、酶標抗體效價測定程序 | |
